Dottorato in MEDICINA SPERIMENTALE

Titolo della tesi: Metodi diagnostici per l’identificazione dell’over-espressione della proteina MRP-4 come fattore di rischio cardiovascolare in pazienti in trattamento cronico con aspirina

La proteina MRP4 (Multidrug Resistance Protein 4), un trasportatore appartenente alla famiglia ABCC, è coinvolta nella regolazione dell’omeostasi nucleotidica e nella modulazione della risposta piastrinica ai farmaci antiaggreganti, in particolare all’aspirina. In questo progetto è stata studiata l’espressione di MRP4 in piastrine di pazienti in trattamento cronico con aspirina, distinguendo tra soggetti senza eventi cardiovascolari e pazienti con storia di sindrome coronarica acuta (SCA). Le analisi di espressione genica e proteica hanno evidenziato nei pazienti con SCA un aumento statisticamente significativo sia dell’mRNA sia della proteina MRP4 rispetto ai soggetti stabili in terapia cronica. È stata inoltre esplorata la possibilità di semplificare il dosaggio di MRP4 mediante approcci immunoenzimatici. Durante i tentativi di solubilizzazione piastrinica con RIPA è stata rilevata inaspettatamente la presenza di MRP4 nel plasma povero di piastrine, portando a investigarne la distribuzione plasmatica. Attraverso la citofluorimetria e isolamento di microvescicole è stato dimostrato che una quota di MRP4 circola associata principalmente a microvescicole di origine piastrinica ed eritrocitaria, ma anche ad esosomi. La concentrazione plasmatica di MRP4 è risultata misurabile tramite ELISA sia nel plasma totale sia in microvescicole ed esosomi, con riduzione significativa dopo immunodeplezione selettiva al fine di assicurarsi che il dosaggio condotto fosse specifico per tale proteina. La classificazione funzionale dei pazienti ha evidenziato che i soggetti Non-Responder all’aspirina presentano una maggiore espressione piastrinica di MRP4 e un numero significativamente più elevato di microvescicole MRP4-positive, sia in condizioni basali che dopo attivazione piastrinica. Dal punto di vista diagnostico, il dosaggio ELISA, applicato per l’analisi degli stessi campioni sottoposti ad esame citofluorimetrico, è risultato essere un metodo affidabile e standardizzabile per quantificare la quota totale di MRP4 plasmatica, pur non consentendo di distinguere tra le diverse forme molecolari o origini cellulari. La citofluorimetria, al contrario, permette una caratterizzazione più dettagliata e consente di differenziare efficacemente i pazienti Responder e Non Responder in base ai livelli di MRP4 sia piastrinico che vescicolare, con potenziale applicazione clinica nella stratificazione del rischio trombotico. In conclusione, questo lavoro sottolinea l’importanza di monitorare l’espressione di MRP-4 come fattore predittivo di resistenza all’aspirina e apre nuove prospettive per l’ottimizzazione delle terapie antiaggreganti, contribuendo alla prevenzione cardiovascolare attraverso approcci diagnostici innovativi, nell’ambito della medicina di precisione per l’identificazione mediante metodiche in ambito clinico di facile impiego e l’ottimizzazione delle terapie antiaggreganti.