Dottorato in MEDICINA MOLECOLARE

Titolo della tesi: A miRNA tumour signature as a prognostic biomarker to decipher the biology of Relapsed/Refractory Diffuse Large B-cell Lymphoma (R/R DLBCL) and improve treatment response

Il linfoma diffuso a grandi cellule B (DLBCL) è un tumore eterogeneo. I fattori prognostici attualmente utilizzati comprendono le alterazioni genomiche e i sottotipi di origine cellulare (COO), ma questi non sono in grado di prevedere con precisione la risposta al trattamento. I microRNA (miRNA), deregolati nei tumori e nel sangue dei pazienti, si sono rivelati promettenti biomarcatori non invasivi. Diversi miRNA circolanti sono stati correlati alla sopravvivenza libera da progressione (PFS), indipendentemente da altri fattori prognostici. Tuttavia, combinazioni di miRNA, piuttosto che singoli miRNA, rappresentano biomarcatori più affidabili, poiché riflettono in modo più completo l’eterogeneità della malattia. In questo progetto di dottorato, abbiamo identificato miRNA circolanti espressi in modo differenziale tra pazienti refrattari e rispondenti al trattamento R-CHOP (rituximab, ciclofosfamide, doxorubicina, vincristina, prednisone), attraverso small RNA-seq su siero di 33 campioni di DLBCL. Tra i miRNA identificati, l'espressione combinata di miR-200c-3p, miR-324-5p e miR-421 ha dimostrato di migliorare le prestazioni predittive ed è risultata significativamente correlata alla PFS dei pazienti. Due dei tre miRNA (miR-324-5p e miR-421) sono espressi in modo differenziale anche nei tessuti tumorali in base alla risposta al trattamento. L'overespressione di miR-324-5p e miR-421 ha comportato una riduzione della proliferazione cellulare, della vitalità e della resistenza a R-CHOP nel sottotipo COO-GCB. Attraverso un'analisi in silico, abbiamo identificato e validato TXNRD1 ed EGLN1, regolatori del metabolismo dell'ossigeno e dell'omeostasi redox, come geni target di miR-324-5p e miR-421, rispettivamente. Il silenziamento e l'inibizione di questi geni ha compromesso la vitalità cellulare e indotto la ferroptosi. I risultati ottenuti supportano il valore di una signature di tre miRNA circolanti come potenziale biomarcatore predittivo della risposta al trattamento, e rafforzano la possibile applicazione di una signature di due miRNA e dei loro target per nuove strategie terapeutiche combinate nel DLBCL.